Apa itu Elektroforesis Gel Poliakrilamida
Jul 29, 2024Poliakrilamida elektroforesis gel (PAGE) adalah teknik yang biasa digunakan dalam biokimia, biologi molekuler, dan bioteknologi untuk memisahkan dan menganalisis biomolekul, khususnya protein dan asam nukleat, berdasarkan ukuran dan muatannya. Teknik ini melibatkan penggunaan matriks gel yang terbuat dari poliakrilamida, suatu zat yang membentuk jaringan berpori ketika dipolimerisasi.
Selama pembuatan gel, monomer akrilamida dicampur dengan zat pengikat silang, biasanya bis-akrilamida, dan inisiator polimerisasi. Campuran ini kemudian dituangkan ke dalam nampan pengecoran gel dan dibiarkan berpolimerisasi, membentuk gel padat. Konsentrasi akrilamida menentukan kisaran ukuran molekul yang dapat dipecahkan, dengan konsentrasi yang lebih rendah cocok untuk molekul yang lebih besar dan konsentrasi yang lebih tinggi untuk molekul yang lebih kecil.
Setelah gel mengeras, gel ditempatkan secara vertikal dalam peralatan elektroforesis yang terdiri dari dua elektroda yang dihubungkan ke catu daya. Gel direndam dalam larutan buffer yang dapat menghantarkan listrik. Sampel yang mengandung biomolekul yang diinginkan, biasanya dicampur dengan buffer pemuatan, dimasukkan ke dalam sumur yang dibuat dalam gel.
Ketika arus listrik dialirkan, biomolekul bermigrasi melalui matriks gel. Migrasi terjadi karena muatan listrik yang dibawa oleh biomolekul dan interaksinya dengan matriks gel. Molekul yang lebih kecil bergerak lebih cepat melalui pori-pori gel, sedangkan molekul yang lebih besar terhambat dan bermigrasi lebih lambat.
Setelah proses elektroforesis, gel dapat diwarnai dengan pewarna tertentu atau diolah dengan antibodi untuk memvisualisasikan dan mendeteksi biomolekul yang terpisah. Gambar gel atau pola pita yang dihasilkan dapat memberikan informasi tentang ukuran, bentuk, dan kelimpahan relatif molekul dalam sampel. Para peneliti sering menggunakan PAGE untuk mengidentifikasi protein, menganalisis kompleks protein, menilai kemurnian protein, dan menentukan ukuran fragmen asam nukleat.
TAG :